- 上海滬崢生物科技有限公司
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- 品牌：上海滬崢
- 產(chǎn)地：國內(nèi)
- 貨號(hào)：HZW0825
- 價(jià)格： ￥1380/千克
- 發(fā)布日期： 2020-03-12
- 更新日期： 2024-12-26
| 產(chǎn)地 | 國內(nèi) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號(hào) | HZW0825 |
| 用途 | 僅限科研 |
| 包裝規(guī)格 | 48T/盒 |
| 純度 | 詳詢客服% |
產(chǎn)品名稱：牛源性成分(Bovine)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法)
包裝：48T
分類：pcr-熒光試劑盒
用途:本產(chǎn)品僅供科研與實(shí)驗(yàn)使用，不用于臨床診斷等
目的：本試劑盒適用于檢測(cè)疑似感染者或發(fā)病動(dòng)物等組織、體液或淋巴結(jié)等標(biāo)本中禽流感病毒rna，用于禽流感病毒感染的輔助診斷，其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。
牛源性成分(Bovine)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法) PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；剛開始時(shí), 探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。
牛源性成分(Bovine)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法)
在PCR 管中加入下列成分：
成份 |
樣品 |
陽性對(duì)照 |
陰性對(duì)照 |
雙酶一管式 RT-PCR Buffer， 2× | 15 uL | 15 uL | 15 uL |
EMCV 專一性引物對(duì) | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
樣品 RNA | 1-5 uL | 無 | 2 uL |
EMCV 陽性對(duì)照 | 無 | 2 uL | 無 |
補(bǔ)超純水到 | 28 uL | 28 uL | 無 |
MMLV-Taq Mix | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
[1] 輕柔混勻后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 RT-PCR。
牛源性成分(Bovine)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法) 電泳檢測(cè)RT-PCR 產(chǎn)物。預(yù)期的PCR 產(chǎn)物長度為 286 bp。
牛源性成分(Bovine)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法) 產(chǎn)品特點(diǎn)：
◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；
◇高靈敏度：檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝；
◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè)；
◇高通量：多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
需要注意*：
PCR反應(yīng)液請(qǐng)?jiān)诒信渲疲缓笾糜赑CR反應(yīng)儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)。這種冷啟動(dòng)法（Cool Start Method）與熱啟動(dòng)法（Hot Start Method）相結(jié)合，更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應(yīng)，增強(qiáng)PCR擴(kuò)增的特異性，能得到良好的PCR結(jié)果。
PCR的反應(yīng)條件：
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個(gè)循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會(huì)出現(xiàn)Smear。
實(shí)驗(yàn)操作
1.模板制備（樣本制備區(qū)）
建議使用配套水生動(dòng)物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒系列產(chǎn)品，具體過程詳見產(chǎn)品說明書。
2.添加模板（模板添加區(qū)，放置于冰盒上進(jìn)行）
剪下所需測(cè)試數(shù)的已含有反應(yīng)液的PCR管，放置在室溫待解凍后，離心30秒后揭開封口膜，向每管反應(yīng)液中分別加入5μL模板，順序?yàn)?/span>NG、待測(cè)樣品模板、PG-VH-P。蓋好配套的PCR管蓋后，渦旋混勻30s，離心1min，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
3. 擴(kuò)增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)）
使用熒光定量PCR儀，熒光基團(tuán)選擇FAM，淬滅基團(tuán)選擇TAMRA。
