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產地 | 國內 |
品牌 | 上海滬崢 |
貨號 | HZT2137 |
用途 | 僅限科研 |
包裝規格 | 50T/盒 |
純度 | 詳詢客服% |
CAS編號 | |
是否進口 |
絮狀支原體(Mycoplasma Flocculare)和豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneumoniae)都是存在于豬呼吸道的傳染性細菌,根據抗原組合物和基因組分析判斷,這兩種支原體親緣關系較近。豬肺炎支原體是豬的地方性肺炎的病原體,而絮狀支原體一般是非致病性的,可能在豬肺炎支原體侵襲機體時造成機會感染。這兩種支原體有著與大多數支原體不同的特征,即很難培養和在固體培養基上的菌落外觀不是典型的“煎蛋”樣子。絮狀支原體大小和形狀不是固定不變的,特別是在生長后期。在生長穩定和趨向下降階段,可發現細絲狀細胞,這種細胞形狀在豬肺炎支原體中不存在。
由于絮狀支原體不引起疾病,雖然在豬群中分布廣泛,但檢測方法很少,主要還是體外培養法,耗時較長。使用PCR法可以對絮狀支原體進行檢測,靈敏度高,且檢測時間短,僅需幾個小時即可獲得結果。
絮狀支原體PCR檢測試劑盒選取了16S rRNA基因的一段序列進行PCR鑒定,引物經BLAST驗證為特異性靶向絮狀支原體,與其他生物的基因組無交叉反應。使用本試劑盒檢測了絮狀支原體、豬肺炎支原體、豬滑液支原體(Mycoplasma Hyosynoviae)和豬鼻支原體(Mycoplasma Hyorhinis)等共19個菌株和分離株,只有絮狀支原體產生特異性擴增條帶。可見本試劑盒具有物種特異性,可用于絮狀支原體的鑒定和檢測。
絮狀支原體PCR檢測試劑盒【使用方法】
1. 樣品處理(樣本處理區)
1.1 樣本前處理
組織:取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿,勻漿后置入潔凈的1.5ml離心管中;
液體標本:取適量標本13000rpm離心2min,棄上清。
1.2 DNA提取
1) 對上述處理好的標本加入40ul 核酸提取液,100℃恒溫處理10分鐘,13,000 rpm離心5分鐘,取上清液轉移至新的1.5ml EP管,-20℃保存;
2. 試劑配制(試劑準備區)
根據代檢測樣本總數,設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1
管陰性對照+1管陽性對照),體系配制如下表:
試劑
WSSV 反應液
酶液
用量(樣本數為N)
20μl
1μl
3. 加樣(樣本處理區)
將步驟1提取的DNA、陽性質控品、陰性質控品各取4μl,加入相應的
反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4. PCR擴增(核酸擴增區)
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量PCR儀反應槽內;
5. 結果分析判定
絮狀支原體PCR檢測試劑盒結果分析條件設定
設置基線(baseline):一般情況下,對ABI 7500、7700等儀器設為6-15cycle,對PE5700設為3-15cycle,對MJ Research Option2設為6-12cycle。特殊情況可對基線適當調整。
設置閾值(threshold):以閾值線剛超過陰性對照擴增曲線(無規則的噪音線)的zui高點。
結果判斷
陽性:檢測樣本Ct值小于等于35.0,且曲線有明顯的指數增長期;
可疑:檢測樣本Ct值大于35.0且小于40.0,重復一次實驗,如果Ct值仍小于40.0,且曲線有明顯的指數增長期,為陽性,否則為陰性;
陰性:檢測不到樣本Ct值或Ct值為40。
試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。.