出血性大腸桿菌O157:H7(EHEC O157)試劑盒(熒光-PCR法)

規(guī)格：50T/盒

自備試劑：樣品 RNA

【檢驗原理】

本試劑盒對出血性大腸桿菌O157:H7(EHEC O157) 基因保守區(qū)設(shè)計特異性的引物和探針[1-3]，用熒光 PCR 技術(shù)對核酸進行體外擴增檢測，從而達到快速檢測之目的。

【儲存條件及有效期】

-20℃避光保存、運輸、避免反復凍融，有效期12個月。

【適用儀器】

ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀。
【保存和運輸】

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6個月，標本運送應采用0℃冰代。

出血性大腸桿菌O157:H7(EHEC O157)試劑盒(熒光-PCR法)它具有下列特點：

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

PCR反應五要素：

參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物： 引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。

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注意事項

：所有試劑使用前需完全解凍，混合均勻，6,000rpm離心數(shù)秒后使用。

1. 樣本處理（樣本處理區(qū)）

待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等，具體提取方法請參照相關(guān)說明書；陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取，可直接使用。

2. 擴增試劑準備（PCR前準備區(qū)）

取N個（N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品）PCR反應管，每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。

組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。

1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s，轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

2.加樣（樣本處理區(qū)）

3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉(zhuǎn)移至擴增區(qū)。