聯系方式
- 上海滬崢生物科技有限公司
- 聯系人：李小姐
- 電話：021-20421762
- 傳真：021-68969289
- 郵箱：869248833@qq.com
- 地址：上海市，懿行路971弄
|
 |
 |
 |
 |
 |
牛副流感病毒3型PCR檢測試劑盒
- 品牌：上海滬崢
- 產地：國內
- 型號：50T/盒
- 貨號：HXG549
- 價格： ￥2380/盒
- 發布日期： 2021-03-16
- 更新日期： 2025-01-03
產品詳請
| 產地 | 國內 |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HXG549 |
| 用途 | 僅用科研 |
| 包裝規格 | 50T/盒 |
| 純度 | 詳詢客服% |
檢驗原理】
本試劑盒用牛副流感3型特異性引物，結合一條特異性探針，用熒光PCR技術對對牛副流感3型DNA進行體外擴增檢測，用于對可疑感染者的病原學診斷。
【儲存條件及有效期】
-20℃避光保存、運輸、避免反復凍融，有效期12個月。
【適用儀器】
ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀。
【保存和運輸】
上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6個月，標本運送應采用0℃冰壺。
【使用方法】
1. 樣品處理（樣本處理區）
1.1 樣本前處理
組織：取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿，勻漿后置入潔凈的1.5ml離心管中；
液體標本：取適量標本13000rpm離心2min，棄上清。
1.2 DNA提取
1) 對上述處理好的標本加入40ul 核酸提取液，100℃恒溫處理10分鐘，13,000 rpm離心5分鐘，取上清液轉移至新的1.5ml EP管，-20℃保存；
2. 試劑配制（試劑準備區）
根據代檢測樣本總數，設所需要的PCR反應管管數為N（N=樣本數+1
管陰性對照+1管陽性對照），體系配制如下表：
試劑
WSSV 反應液
酶液
用量（樣本數為N）
20μl
1μl
3. 加樣（樣本處理區）
將步驟1提取的DNA、陽性質控品、陰性質控品各取4μl，加入相應的
反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4. PCR擴增（核酸擴增區）
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量PCR儀反應槽內；
試劑盒準備物品：
清理液（A） 毫升
染色液（t B） 微升
稀釋液（C） 毫升
溶解液（tD） 毫升
產品說明書 1份
反應五要素：
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
