單純皰疹病毒(HSV)試劑盒(熒光-PCR法)

規格：50T/盒

英文名稱：HSV Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規格】50T/盒

自備試劑：樣品 RNA

【檢驗原理】

本試劑盒對單純皰疹病毒(HSV)基因保守區設計特異性的引物和探針[1-3]，用熒光 PCR 技術對核酸進行體外擴增檢測，從而達到快速檢測之目的。

【儲存條件及有效期】

-20℃避光保存、運輸、避免反復凍融，有效期12個月。

【適用儀器】

ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀。
【保存和運輸】

上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6個月，標本運送應采用0℃冰代。

結果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數增長曲線；

可疑：檢測通道 35值≤38，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 35值≤38， 且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測結果 Ct 值>38 或無 Ct 值。

質控標準

陰性質控品：Ct 值>38 或無 Ct 值；

陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°C左右）時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。基于聚合酶制造的PCR儀實際就是一個溫控設備，能在變性溫度，復性溫度，延伸溫度之間很好地進行控制。

實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程， 通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

單純皰疹病毒(HSV)試劑盒(熒光-PCR法)樣本提取操作

1. 取 200μL 處理好的樣本（不足 200μL，可以加入 PBS 緩沖液或者生理鹽水補足 200μL），加入 500μL

裂解液，振蕩 30 秒，室溫靜止 2 分鐘。注：針對   難裂解樣本，室溫靜置時間可延長至5 分鐘。

2. 把上述混合液轉移到吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液體時盡量不要吸到懸浮雜質，以免阻塞吸附膜），10000rpm 離心 1 分鐘，棄去套管中液體。

3. 向吸附柱中加入 500μL 去蛋白漂洗液，12000rpm 離心 30 秒，棄去套管中液體。

4. 向吸附柱中加入 500μL 洗滌液，12000rpm 離心 30 秒，棄去套管中液體。

5. 向吸附柱中加入 500μL 洗滌液，12000rpm 離心 30 秒，棄去套管中液體。

6. 12000rpm 再次離心 2 分鐘。

7. 把吸附柱轉移至新的 1.5mL 滅菌離心管中，向吸附柱中加入 50μL 洗脫液，并于室溫溫育 2 分鐘。

8.12000rpm 離心 1 分鐘，棄去吸附柱，1.5mL 滅菌離心管中液體即為 DNA/RNA 溶液。提取的 DNA/RNA

可直接用于各種下游應用試驗，如不立即使用，請于-80℃保存。