登革熱病毒2型(DFV-II)試劑盒(熒光-PCR法)為上海滬崢PCR主要產品之一，產品優勢 樣品種類多，質控嚴格，高特異性，供貨快，已被國內外廣大科研工作者使用，被稱謂：質量信得過產品
通用名稱：登革熱病毒2型(DFV-II)試劑盒(熒光-PCR法)

規格：50T/盒

英文名稱：RSV-B Detection Kit (Real-Time PCR Method)

自備試劑：樣品 RNA

【檢驗原理】

本試劑盒對登革熱病毒2型(DFV-II)基因保守區設計特異性的引物和探針[1-3]，用熒光 PCR 技術對核酸進行體外擴增檢測，從而達到快速檢測之目的。

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融不超過 5 次。有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標本采集】取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g。

【保存和運輸】上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃。但不能超過 6 個月，標本運送應采用 0℃冰代。【使用方法】樣品處理（樣本處理區）

1.

實驗步驟：

一、 樣品RNA的抽提

二、 1. 取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。

三、 2. 兩相分離 每1 ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2 ml的氯仿，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12 000 rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。

四、 3. RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12 000 rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。

五、 

六、 4. RNA清洗 移去上清液，每1 mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1 ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7 000 rpm離心5分鐘。

七、 

八、 5. RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

九、 

十、 6. 溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。

主要服務：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

登革熱病毒2型(DFV-II)試劑盒(熒光-PCR法)【注意事項】

1. 每次使用，開蓋之前請先瞬時離心，使試劑沉于管底。
2. 所有試劑在要求溫度下保存，盡量減少反復凍融，使用后的試劑應立即放回。
3. 本試劑盒為10頭份量試劑，加樣和反應程序嚴格按照說明書進行，由于操作失誤、移液器不 、定時不準確造成無結果情況，不予負責。
4. 吸頭、離心管和PCR管在使用前，應高壓滅菌。
5. 注意防止試劑污染，在有效期限內用完。