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產地 | 國內 |
品牌 | 上海滬崢 |
貨號 | HXG706 |
用途 | 僅用科研 |
包裝規格 | 50T/盒 |
是否進口 | 否 |
寨卡(zika)病毒試劑盒(熒光-PCR法)為上海滬崢PCR主要產品之一,產品優勢 樣品種類多,質控嚴格,高特異性,供貨快,已被國內外廣大科研工作者使用,被稱謂:質量信得過產品
通用名稱:寨卡(zika)病毒試劑盒(熒光-PCR法)
規格:50T/盒
英文名稱:zika Detection Kit (Real-Time PCR Method)
自備試劑:樣品 RNA
【檢驗原理】
本試劑盒對寨卡(zika)病毒基因保守區設計特異性的引物和探針[1-3],用熒光 PCR 技術對核酸進行體外擴增檢測,從而達到快速檢測之目的。
寨卡(zika)病毒試劑盒(熒光-PCR法)試劑組成】
名 稱 |
規 格 |
酶液 |
50μL×1 管 |
zika反應液 |
500μL×2 管 |
zika陽性質控品 |
50μl ×1 管 |
陰性質控品 |
250μl×1 管 |
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融不超過 5 次。有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
【標本采集】取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g。
【保存和運輸】上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃。但不能超過 6 個月,標本運送應采用 0℃冰代。【使用方法】樣品處理(樣本處理區)
1.1 樣本前處理:
取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g,剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續研磨,待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中, 8000rpm 離心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
2 DNA 提取
樣本 DNA 的提取采用 DNA 提取試劑盒(離心柱提取法),請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。
試劑配制(試劑準備區)
根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 10 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:
試劑 |
zika 反應液 |
酶液 |
用量 |
20μL |
1μL |
將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL,加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
PCR 擴增(核酸擴增區)
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內;
4.2 設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25ul;熒光通道選擇: 檢測通道
(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請勿選擇 ROX 參比熒光。
4.3 推薦循環參數設置:
步驟 |
循環數 |
溫度 |
時間 |
收集熒光信號 |
1 |
1 cycle |
95℃ |
10min |
否 |
2 |
40 cycles |
94℃ |
15sec |
否 |
55℃ |
30sec |
是 |
注意事項
:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區)
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關說明書;陽性質控品及陰性質控品無需提取,可直接使用。
2. 擴增試劑準備(PCR前準備區)
取N個(N=陰性質控品+待檢樣本+陽性質控品)PCR反應管,每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s,轉移至樣本處理區。
2.加樣(樣本處理區)
3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質控品和陽性質控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉移至擴增區。