- 上海滬崢生物科技有限公司
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- 地址:上海市,懿行路971弄
- 品牌:上海滬崢
- 產(chǎn)地:國(guó)內(nèi)
- 型號(hào):50T/盒
- 貨號(hào):HXG706
- 價(jià)格: ¥2380/盒
- 發(fā)布日期: 2021-03-22
- 更新日期: 2024-12-27
產(chǎn)地 | 國(guó)內(nèi) |
品牌 | 上海滬崢 |
貨號(hào) | HXG706 |
用途 | 僅用科研 |
包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
是否進(jìn)口 | 否 |
寨卡(zika)病毒試劑盒(熒光-PCR法)為上海滬崢PCR主要產(chǎn)品之一,產(chǎn)品優(yōu)勢(shì) 樣品種類多,質(zhì)控嚴(yán)格,高特異性,供貨快,已被國(guó)內(nèi)外廣大科研工作者使用,被稱謂:質(zhì)量信得過(guò)產(chǎn)品
通用名稱:寨卡(zika)病毒試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格:50T/盒
英文名稱:zika Detection Kit (Real-Time PCR Method)
自備試劑:樣品 RNA
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒對(duì)寨卡(zika)病毒基因保守區(qū)設(shè)計(jì)特異性的引物和探針[1-3],用熒光 PCR 技術(shù)對(duì)核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè),從而達(dá)到快速檢測(cè)之目的。
寨卡(zika)病毒試劑盒(熒光-PCR法)試劑組成】
名 稱 |
規(guī) 格 |
酶液 |
50μL×1 管 |
zika反應(yīng)液 |
500μL×2 管 |
zika陽(yáng)性質(zhì)控品 |
50μl ×1 管 |
陰性質(zhì)控品 |
250μl×1 管 |
【儲(chǔ)存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融不超過(guò) 5 次。有效期 12 個(gè)月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。
【標(biāo)本采集】取動(dòng)物組織及其制品、食品或飼料約 1g。
【保存和運(yùn)輸】上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長(zhǎng)期保存可置-70℃。但不能超過(guò) 6 個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 0℃冰代。【使用方法】樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1 樣本前處理:
取動(dòng)物組織及其制品、食品或飼料約 1g,剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中, 8000rpm 離心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
2 DNA 提取
樣本 DNA 的提取采用 DNA 提取試劑盒(離心柱提取法),請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。
試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照;樣品每滿 10 份,多配制 1 份),每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 |
zika 反應(yīng)液 |
酶液 |
用量 |
20μL |
1μL |
將步驟 1 提取的 DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);
4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul;熒光通道選擇: 檢測(cè)通道
(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光。
4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
步驟 |
循環(huán)數(shù) |
溫度 |
時(shí)間 |
收集熒光信號(hào) |
1 |
1 cycle |
95℃ |
10min |
否 |
2 |
40 cycles |
94℃ |
15sec |
否 |
55℃ |
30sec |
是 |
注意事項(xiàng)
:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等,具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說(shuō)明書;陽(yáng)性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無(wú)需提取,可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))
取N個(gè)(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽(yáng)性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。