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貂源性成分(Martes)試劑盒(熒光-PCR法)
  • 品牌:上海滬崢
  • 產地:國內
  • 貨號:HXG731
  • 價格: ¥1380/千克
  • 發布日期: 2021-03-29
  • 更新日期: 2024-12-27
產品詳請
產地 國內
品牌 上海滬崢
貨號 HXG731
用途 僅限科研
包裝規格 50T/盒
純度 詳詢客服%
是否進口


產品名稱:貂源性成分(Martes)試劑盒(熒光-PCR法)
包裝:50T
用途:本產品僅供科研與實驗使用,不用于臨床診斷等
目的:本試劑盒適用于檢測疑似感染者或發病動物等組織、體液或淋巴結等標本中禽流感病毒rna,用于禽流感病毒感染的輔助診斷,其檢測結果僅供參考。
貂源性成分(Martes)試劑盒(熒光-PCR法)PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;剛開始時, 探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。

鹿源性成分(Deer)試劑盒(熒光-PCR法)PCR 管中加入下列成分:

成份

樣品

陽性對照

陰性對照

雙酶一管式 RT-PCR Buffer

15 uL

15 uL

15 uL

EMCV 專一性引物對

2 uL

2 uL

2 uL

樣品 RNA

1-5 uL

2 uL

EMCV 陽性對照

2 uL

補超純水到

28 uL

28 uL

MMLV-Taq Mix

2 uL

2 uL

2 uL

鹿貂源性成分(Martes)試劑盒(熒光-PCR法)操作步驟

取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g,手術剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續研磨,待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中, 8000rpm 離心 2min,取上清液 100μL 1.5mL 滅菌離心管中。

DNA 提取

樣本 DNA 的提取采用 DNA 取試劑盒(離心柱提取法),請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。試劑配制(試劑準備區)根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 10 份,多配制 1 ),每測試反應體系配制如下表:

試劑

Duck 反應液

酶液

用量

20μL

1μL

加樣(樣本處理區)將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL,加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。


PCR 擴增(核酸擴增區)

4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內;

4.2 設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25ul;熒光通道選擇: 檢測通道

Reporter Dye)FAM, 淬滅通道Quencher Dye)NONE,請勿選擇 ROX 參比熒光。

4.3 推薦循環參數設置:

步驟

循環數

溫度

時間

收集熒光信號

1

1 cycle

95℃

10min

2

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec

結果分析判定設置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲線出


現整體傾斜時,根據分析后圖像調節 Baseline start (一般可在 3~15 范圍內調節)、stop (一般可在 5~20 范圍內調節),以及 Threshold Value (上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。

判斷a) 檢測通道 Ct ≤30,有 FAM 熒光信號檢出,并出現典型的擴增曲線,判斷樣品為陽性。

b) 30≤35 時,且有典型的擴增曲線時,則需重復實驗。再次擴增后檢測體系的Ct 值仍≤35,且有典型的擴增曲線,則判定該樣品含有相應的動物源性成分。當再次擴增后,檢測體系 Ct 值>35,或無典型的擴增曲線,則判定該樣品不含相應的動物源性成分。

質控標準

a) 空白對照:無FAM 熒光信號檢出或 Ct ≥35,未出現典型的擴增曲線。

b) 陰性對照:無FAM 熒光信號檢出或 Ct ≥35,未出現典型的擴增曲線。

c) 陽性對照:有 FAM 熒光信號檢出,并出現典型的擴增曲線Ct 值<30。

d) 以上應同時滿足,否則本次實驗無效。


需要注意*:

PCR反應液請在冰中配制,然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法(Cool Start Method)與熱啟動法(Hot Start Method)相結合,更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應,增強PCR擴增的特異性,能得到良好的PCR結果。

PCR的反應條件:

因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。

◇ 循環次數

根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環。

如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,則會出現Smear。


貂源性成分(Martes)試劑盒(熒光-PCR法)特點

1,嚴格的質控體系:所有試劑盒從原料到成品經過嚴格的質控,確保試劑盒質量及穩定性

2,產品不斷優化,很好的靈敏度;

3,綜合指標特性,研發便捷操作的試劑盒;

4,檢測驗證樣本多樣;

5,專業的研發團隊為客戶提供個性化的定*務;

6,提供食品安全藥物殘留Elisa試劑盒,以及快檢試劑盒

7,完善專業的售前售后服務