- 上海滬崢生物科技有限公司
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- 地址:上海市,懿行路971弄
- 品牌:上海滬崢
- 產地:國內
- 貨號:HXG731
- 價格: ¥1380/千克
- 發布日期: 2021-03-29
- 更新日期: 2024-12-27
產地 | 國內 |
品牌 | 上海滬崢 |
貨號 | HXG731 |
用途 | 僅限科研 |
包裝規格 | 50T/盒 |
純度 | 詳詢客服% |
是否進口 | 否 |
產品名稱:貂源性成分(Martes)試劑盒(熒光-PCR法)
包裝:50T
用途:本產品僅供科研與實驗使用,不用于臨床診斷等
目的:本試劑盒適用于檢測疑似感染者或發病動物等組織、體液或淋巴結等標本中禽流感病毒rna,用于禽流感病毒感染的輔助診斷,其檢測結果僅供參考。
貂源性成分(Martes)試劑盒(熒光-PCR法)PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;剛開始時, 探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。
鹿源性成分(Deer)試劑盒(熒光-PCR法)在PCR 管中加入下列成分:
成份 |
樣品 |
陽性對照 |
陰性對照 |
雙酶一管式 RT-PCR Buffer, 2× |
15 uL |
15 uL |
15 uL |
EMCV 專一性引物對 |
2 uL |
2 uL |
2 uL |
樣品 RNA |
1-5 uL |
無 |
2 uL |
EMCV 陽性對照 |
無 |
2 uL |
無 |
補超純水到 |
28 uL |
28 uL |
無 |
MMLV-Taq Mix |
2 uL |
2 uL |
2 uL |
鹿貂源性成分(Martes)試劑盒(熒光-PCR法)操作步驟
取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g,手術剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續研磨,待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中, 8000rpm 離心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
DNA 提取
樣本 DNA 的提取采用 DNA 提取試劑盒(離心柱提取法),請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。試劑配制(試劑準備區)根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 10 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:
試劑 |
Duck 反應液 |
酶液 |
用量 |
20μL |
1μL |
PCR 擴增(核酸擴增區)
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內;
4.2 設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25ul;熒光通道選擇: 檢測通道
(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請勿選擇 ROX 參比熒光。
4.3 推薦循環參數設置:
步驟 |
循環數 |
溫度 |
時間 |
收集熒光信號 |
1 |
1 cycle |
95℃ |
10min |
否 |
2 |
40 cycles |
94℃ |
15sec |
否 |
55℃ |
30sec |
是 |
現整體傾斜時,根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。
判斷a) 檢測通道 Ct 值≤30,有 FAM 熒光信號檢出,并出現典型的擴增曲線,判斷樣品為陽性。
b) 當 30
質控標準
a) 空白對照:無FAM 熒光信號檢出或 Ct 值≥35,未出現典型的擴增曲線。
b) 陰性對照:無FAM 熒光信號檢出或 Ct 值≥35,未出現典型的擴增曲線。
c) 陽性對照:有 FAM 熒光信號檢出,并出現典型的擴增曲線,Ct 值<30。
d) 以上應同時滿足,否則本次實驗無效。
需要注意*:
PCR反應液請在冰中配制,然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法(Cool Start Method)與熱啟動法(Hot Start Method)相結合,更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應,增強PCR擴增的特異性,能得到良好的PCR結果。
PCR的反應條件:
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環。
如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,則會出現Smear。
貂源性成分(Martes)試劑盒(熒光-PCR法)特點
1,嚴格的質控體系:所有試劑盒從原料到成品經過嚴格的質控,確保試劑盒質量及穩定性
2,產品不斷優化,很好的靈敏度;
3,綜合指標特性,研發便捷操作的試劑盒;
4,檢測驗證樣本多樣;
5,專業的研發團隊為客戶提供個性化的定*務;
6,提供食品安全藥物殘留Elisa試劑盒,以及快檢試劑盒
7,完善專業的售前售后服務