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細(xì)胞的復(fù)蘇方法

發(fā)布時(shí)間： 2016-12-12   

1．復(fù)溫從液氮中取出凍存管，立即放入37～40℃水浴中，快速搖晃直至完全融化，應(yīng)在1分鐘內(nèi)完成復(fù)溫過程。

2．去除凍存液無菌打開凍存管，將細(xì)胞凍存液移入無菌的離心管內(nèi)，加入約5 ml生長液，輕輕搖勻，將細(xì)胞懸液經(jīng)1000r/min離心5分鐘，棄上清液。

3．復(fù)蘇培養(yǎng)離心后細(xì)胞沉淀用少量生長液懸浮，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中補(bǔ)齊培養(yǎng)液，即配成所需要的細(xì)胞濃度，置37℃,5% CO₂孵箱培養(yǎng)。或無菌操作打開凍存管，將細(xì)胞懸液吸到培養(yǎng)瓶中補(bǔ)足生長液后，置37℃ 5% C0₂孵箱中培養(yǎng)，4～6小時(shí)后，待細(xì)胞貼壁后輕輕倒掉含凍存液的生長液，換生長液后繼續(xù)培養(yǎng)。